现代化工

现代化工 ›› 2014, Vol. 34 ›› Issue (4) : 74-77. DOI:

科研与开发

超滤离心在双水相萃取大肠杆菌谷氨酸脱羧酶中的应用

李海鑫, 孙波, 赵晓, 樊庆, 孙盛, 孔庆敏

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摘要

建立聚乙二醇(PEG)/磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系，通过对大肠杆菌(Escherichia coli AS1.505)细胞进行超声波破碎制得谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase，GAD)酶液，并利用双水相萃取对GAD进行分离纯化，然后，采用超滤离心对双水相上相中的GAD与PEG进行分离并分别回收。实验结果表明，大部分GAD分配于上相，其纯化倍数为55.60，酶活率为97.78%。通过响应面分析，对超滤离心工艺参数进行优化，确定了超滤离心转速为10 000r/min，离心时间为20min，混合液的稀释倍数为5倍，此条件下GAD的回收率为81.52%，PEG的回收率为84.41%。